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大鼠ELISA試劑盒實驗要求及注意事項
點擊次數(shù):1177 更新時間:2019-04-17

                                               大鼠ELISA試劑盒實驗要求及注意事項

【操作步驟】

標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,依次進行稀釋數(shù)倍。

加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

配液:將30倍(48T 的20 倍)濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

溫育:操作同3。

洗滌:操作同5。

顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

 

【注意事項】

1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

2、濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3、各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

4、請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6、底物請避光保存。

7、嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8、所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9、本試劑不同批號組分不得混用。

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